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riboEDIT CRISPR-Cas9基因编辑系统为即用型化学合成CRISPR /Cas 9系统,体系包含了表达Cas9核酸酶的mRNA、靶向目的基因片段设计合成的crRNA 和化学合成tracrRNA,通过简单的转染步骤即可实现哺乳动物细胞基因编辑;或可选择Cas9 RNP(核糖核蛋白复合物)系统,即化学合成的crRNA, tracrRNA及Cas9蛋白,在转染后快速发生高效率基因编辑。该体系无需gRNA表达载体克隆步骤,无DNA整合的风险,剂量控制更加准确,即用型的crRNA,大大简化基因编辑的实验步骤,在多个crRNA的指导下可实现多个靶点的编辑,尤其是不需要病毒级实验室,大大简化基因编辑的技术门槛。

(本产品还未上市,开放订购日期请以本网站公布为准)

产品优势

1. 锐博自主专利技术:缩短长度的crRNA和tracrRNA
2. 比质粒体系具有更高的编辑效率
3. 瞬时表达,降低脱靶率
4. 不需要病毒级实验室,降低基因编辑对实验环境要求
5. 无需繁琐的克隆构建过程
6. 毒性更低,激活先天免疫反应更小
7. riboEDIT crRNA更适合于高通量合成

设计合成crRNA

采用锐博生物优化的生物信息学设计,实验者无需具备crRNA/sgRNA设计经验,riboEDIT crRNA包含20个与目标DNA片段互补配对的核苷酸(原间隔序列)和与tracrRNA互补配对的重复序列。对于人类、大鼠、小鼠细胞的基因,每个基因客户可选择设计3 – 6段单独的sgRNA,锐博生物提供crRNAs设计合成服务,提供更多实验数据,使结果更精确。

化学合成tracrRNA

riboEDIT tracrRNA采用化学合成tracrRNA,经HPLC纯化,能够抗核酸酶,能与crRNA结合形成crRNA/tracrRNA复合物,共同指导Cas9蛋白切割双链DNA。

Cas9核酸酶表达mRNA

riboEDIT Cas9 Expression mRNA是体外转录生成的Cas9 mRNA,具有帽子和polyA尾巴结构。编码载体为人源密码子优化的 S. pyogenes Cas9,带有核定位信号(NLS),C端的一个1XFLAG标签,5’非翻译区 (5’UTR)及3’非翻译区(3’UTR),以促进mRNA的翻译和提高mRNA的稳定性,适用于哺乳动物细胞的基因编辑。经过严格的质量控制,保证质量和纯度。

crRNA阴性对照

锐博生物提供的crRNA阴性对照在人类、大鼠、小鼠细胞中无任何目标位点,用于测试细胞内对于CRISPR-Cas9复合物的应答,对于全部潜在的PAM旁边的目的基因片段至少有三个不配对的碱基或缺失。

crRNA阳性对照

锐博生物提供的crRNA阳性对照可用于检测基因剪切体系的正确性。

实验数据 - RiboEDIT CRISPR-Cas体系高效的基因组剪切效率

riboEDIT Cas9 Expression mRNA具有高效的基因组剪切效率

图1. MHCC97H细胞共转染10pmol riboEDIT crRNA、10pmol riboEDIT CRISPR-Cas9 tracrRNA和1ug riboEDIT Cas9 Expression mRNA,48小时后 riboEDIT T7EI Enzyme酶切检测靶位点的剪切效率,候选7个靶基因的剪切条带及编辑效率如图所示,#1#2表示同一基因不同位点设计的2条crRNA。

riboEDIT Cas9 RNP具有高效的基因组剪切效率

图2. MHCC97H细胞共转染6pmol riboEDIT crRNA、6pmol riboEDIT CRISPR-Cas9 tracrRNA和1ug r riboEDIT Cas9 Enzyme,48小时后 riboEDIT T7EI Enzyme酶切检测靶位点的剪切效率,候选7个靶基因的剪切条带及编辑效率如图所示,#1#2表示同一基因不同位点设计的2条crRNA。

图3.  riboEDIT CRISPR-Cas9 mRNA基因编辑体系与riboEDIT Cas9 RNP复合物具有等同的靶位点剪切活性。

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