基于qPCR 检测技术的miRNA 表达及差异分析是对测序、芯片结果的有效补充与验证，是进一步确定研究对象并做后续功能研究或生物标志物筛选的基础。
锐博生物自主开发了Bulge-Loop™ 和miDETECT A Track™ 以及用于两种不同的 miRNA qPCR检测方法的试剂盒、引物及提供对照，拥有颈环法和加尾法qPCR检测方法的专利技术。【高灵敏度小RNA定量检测方法及试剂盒，专利授权号：CA201410039162.6】。锐博生物提供最新miRBase 数据库中人、小鼠、大鼠的所有miRNA qRT-PCR 引物，并不断补充更新，其它物种的miRNA qRT-PCR 引物及miRBase未收录的成熟体miRNA qRT-PCR 引物需定制，最小订购量为200T.
产品优势
锐博生物专利：高灵敏度小RNA定量检测方法及试剂盒. 授权专利号：CA201410039162.6
Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR
1、高特异性，采用具有茎凸环结构的逆转录引物以和高特异miRNA正向引物，确保该方法的特异性，能准确检测出高度同源的miRNA
2、高灵敏度，比传统的miRNA 定量检测方法具有更宽广的动态变化范围，无需担心因样品量少或者miRNA 表达量低而无法精确检测
3、高准确性，可验证微阵列表达谱数据的准确性，有效地检测出miRNA 表达量，且重复性高。
Bulge-Loop miRNA颈环法引物套装包括：Bulge-Loop RT primer、Forward primer和Reverse primer。
miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR
1、灵敏度高，精确定量miRNA表达量
2、特异性好，甚至可准确区分miRNA 成熟链和前体
3、节省样本，一次转录可同时检测多种miRNA 及其他各种RNA
4、适用于各种样品的miRNA 表达谱检测
miDETECT A miRNA加尾法引物：Forward Primer。
哪种miRNA qPCR检测方法更适合您？
| Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR | miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR | |
|---|---|---|
| 检测方法 | SYBR Green 染料法 | SYBR Green 染料法 |
| 灵敏度 | 能检测总RNA 量≥10ng样品中的miRNA 表达量 | 准确鉴定总RNA 量≥10ng样品中的miRNA 表达量 |
| PCR 步骤 | 特异性PCR 正向引物（与 miRNA 部分序列匹配） | 特异性PCR 正向引物（与 miRNA 全部序列匹配） |
| 特异性 | 最大能分辨仅有一个碱基差别的miRNA | 能分辨绝大部分成熟miRNA |
| 特点 | 特异性强，灵敏度高 特异地检测较低样本量中的目的miRNA | 通用性强，节省样本 单个样本可同时检测大量miRNA 及其他类型RNA |
| 反转录步骤 | 特异性RT 引物（每个 miRNA 需要单独RT） | 针对Poly(A) 化RNA 的通用型RT 引物 |
技术支持
miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR能够准确检测miRNA表达量，并在较宽的定量区间内得到很好的标准曲线，检测限度从1fM 至100pM，适合进行miRNA 准确定量检测。
以 6 个数量级连续梯度（1fM, 10fM, 100fM, 1pM, 10pM, 100pM）稀释的miRNA 标准品（hsa-miR-16、hsa-miR-21）进行miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 检测，每个梯度3 个平行样，扩增效率（E）超过96%，检测相关性（R2）达到1.00，灵敏、准确。
miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 采用特异性优化的设计算法，能够将单个样品中的多种RNA 通过通用的Poly(A) Tailing 和Uni-RT 反应，及特异性qPCR 检测，可准确区分序列相似的miRNA 成熟链，重复性好，可信度高，甚至能区分大部分成熟体和前体。
分别以8 个10pM 的miDETECT™ miRNA qRT-PCR Standard RNA 为模板，采用8 种miDETECT A Track™ miRNA引物进行特异性qRT-PCR 检测，结果表明仅对应的miRNA 引物能够特异性检测，无非特异性扩增现象出现。
A：miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 检测扩增曲线; B：引物特异性统计分析结果
由于对样品进行的Poly(A) Tailling 和Uni-RT 具有通用性，所以经过一次反转录得到的产物即可检测mature miRNA、miRNA precursor、snoRNA、snRNA、piRNA、lncRNA 和mRNA ( 注：引物需要特殊设计) 等多种RNA，检测结果准确且重复性高。
样品中总RNA 采用miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 方法检测miRNA(hsa-miR-638、hsa-miR-760、hsa-miR-1207、hsa-miR-4281)，snRNA(U6)，lncRNA(7SL1) 为模板，准确定量检测多种RNA 的表达量。
代表性客户文章
- Sun Y, Wang Q, Zhang Y, et al. Multigenerational maternal obesity increases the incidence of HCC in offspring via miR-27a-3p[J]. Journal of Hepatology, 2020, 73(3): 603-615.（miRNA加尾法试剂盒、引物）
- Ma H, Chang H, Yang W, et al. A novel IFNα-induced long noncoding RNA negatively regulates immunosuppression by interrupting H3K27 acetylation in head and neck squamous cell carcinoma[J]. Molecular cancer, 2020, 19(1): 1-16.（miRNA加尾法和茎环法试剂盒）
- Zhao Y, Zhao M F, Jiang S, et al. Liver governs adipose remodelling via extracellular vesicles in response to lipid overload[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 1-17.（miRNA茎环法试剂盒、引物）
- Dou G, Tian R, Liu X, et al. Chimeric apoptotic bodies functionalized with natural membrane and modular delivery system for inflammation modulation[J]. Science advances, 2020, 6(30): eaba2987.（miRNA茎环法引物）
- Kang M, Tang B, Li J, et al. Identification of miPEP133 as a novel tumor-suppressor microprotein encoded by miR-34a pri-miRNA[J]. Molecular cancer, 2020, 19(1): 1-14.（miRNA茎环法引物）
- Wu P, Cai J, Chen Q, et al. Lnc-TALC promotes O 6-methylguanine-DNA methyltransferase expression via regulating the c-Met pathway by competitively binding with miR-20b-3p[J]. Nature communications, 2019, 10(1): 1-15.（miRNA茎环法试剂盒）
- Liu L, Liu Y, Feng C, et al. Lithium-containing biomaterials stimulate bone marrow stromal cell-derived exosomal miR-130a secretion to promote angiogenesis[J]. Biomaterials, 2019, 192: 523-536.（miRNA加尾法试剂盒、引物）
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