
锐博生物运用pmiR-RB-Report™报告基因检测系统构建您研究的 miRNA 靶基因3’UTR 区域,您只需将miRNA mimic 与构建好的靶基因载体共转,即可检测miRNA 是否对靶基因有调控作用。pmiR-RB-Report™报告基因检测系统专门用来检测miRNA 与靶基因的结合活性,该报告系统包含T7 启动子驱动的报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR 区域,通过对该荧光的检测,即可验证miRNA 对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc)用于监测转染效率,靶标表达效率,可作为稳定内参。
锐博生物可以根据客户需要定制任何基因的3’UTR 双荧光素载体。
pmiR-RB-ReportTM双荧光素酶质粒载体转染进入细胞后,转录出 hRluc 与靶基因3’UTR 区域组合而成的特殊mRNA,如果miRNA mimic能够与包含靶基因3’UTR 的mRNA 互补结合,则荧光素酶的表达活性也受到显著影响,通过检测荧光素酶的荧光强度可定量分析miRNA 对靶基因的mRNA 调控效果。
miRNA 靶基因验证实验通常需要设置预测靶点突变组,以确认miRNA靶点正确性。只有两者结合,才能准确地验证miRNA靶点信息。
项目案例

荧光素酶报告基因试验数据显示miR-7 inhibitor 处理后活性更高,miR-7 mimic 处理后活性下降。Yu Q, et al. J CrohnsColitis. 2016.

转染miR-9 inhibitor 进SH-SY5Y 和SK-N-SH 细胞,增加了荧光素酶活性,而Mutant 3’ -UTR 没有此效果。 Zhang H, et al. Mol Cancer Ther. 2012.
注意事项:
由于构建难度和实验难度随着基因3’UTR 长度的增加而显著升高,建议构建长度不超过2.5kb。