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siRNA筛选实验是简单易行的确定基因功能的实验,序列设计是RNAi实验成功的关键,选择不同区域设计siRNA会获得不同的效果,锐博生物为您提供有效siRNA筛选服务,提供常规siRNA、套装siRNA和siRNA定制文库或全基因组文库,少数的筛选实验运用qPCR方法验证沉默效率,大量的筛选实验还可以运用双平台高内涵筛选策略,确保更可靠更有意义的实验发现,全面加速您的mRNA、lncRNA和circRNA实验研究进程。

服务流程

a、针对待筛选基因设计并合成三对siRNA及基因qPCR引物;
b、进行基因qPCR引物有效性检测;
c、细胞培养:提供常规肿瘤细胞系(如A549、Hela等),其他细胞系需定制;
d、转染3对靶基因siRNA:1对Negative control,1对Positive control,1对 Transfection control;
e、荧光显微镜检测转染对照的转染效果;
f、48小时后抽提细胞总RNA,以内参基因作为参照,用qRT-PCR方法检测mRNA水平siRNA沉默效率;
g、鉴定有效siRNA后(沉默效果>70%),向客户提供筛选实验报告。

项目举例

针对p65基因的三对siRNA及阴性对照(锐博生物)以50nM终浓度转染A549细胞(riboFECT CP 转染试剂),48h后qRT-PCR方法检测p65基因mRNA水平的表达,检测三对siRNA的沉默效果及siRNA转染效率。

图2 采用荧光转染对照检查该细胞系的siRNA转染效率

图3 采用qPCR方法检测siRNA转染后的P65及ACTB的RNA表达水平

图4 有效siRNA统计效率图

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