In vivo siRNA最关键的问题就是siRNA稳定性及给药策略，适当的化学修饰是解决siRNA稳定的重要方法之一。锐博生物研发的genOFFTM in vivo siRNA，采用特殊的化学修饰方式，大大提高了siRNA的血清稳定性，并保持了siRNA的高效活性；通过采用国际先进的处理方法，能够最大限度降低对实验动物的毒性。
In vivo siRNA给药方法大致分为系统给药（如静脉给药、腹腔给药等）和局部给药（如皮下注射，玻璃体给药，鞘内给药等）。siRNA系统给药每次注射5~20nmol/20g体重，局部给药则需每次注射1~5nmol/20g体重, 给药频率往往是一周2~3次，也可根据实验方案灵活设定给药剂量和频次，探索更佳的实验条件。
首先需要根据动物模型和实验方案，确定给药量和给药次数，然后计算出实验所需的总用量。需要根据不同的器官来选择给药方法，而给药量因不同给药方法和实验目的而异。如肝脏、肾脏、肌肉等常用静脉注射（系统给药）；而皮下肿瘤则常用到瘤内注射（局部给药）。
局部给药（Local administration）
适用范围：浅表器官和组织，包括眼、肺、脑、肌肉、皮下组织、叶鞘组织等。
特点：最直接最常用的导入方式，siRNA 的导入效率较高，用量少，siRNA 能很快被吸收。因此，genOFFTM in vivo siRNA 在局部注射的应用中更有优势。
系统给药（Systemic administration）
适用范围：siRNA 具有广泛的组织分布，包括心、肝、肾、肺等。
特点：一些无法通过局部给药方式到达的靶位，如深入的内脏器官和一些散在分布的靶位（如淋巴细胞，转移性肿瘤细胞等），一般使用系统注射方式。
小编之前已经给大家整理一些关于动物用siRNA产品的客户应用案例，详情请见：
1、动物用siRNA案例应用策略解析(20210609)丨含动物造模、实验处理、给药方式、给药剂量……
2、【更新】动物用siRNA案例应用策略解析(20211015)丨含给药方式、给药剂量、动物造模、实验处理……
本期文章小编给大家更新了几篇关于in vivo siRNA给药方式的客户应用案例，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！
应用案例1：
Molecular Cancer（IF27.401）丨ciRS-7 is a prognostic biomarker and potential gene therapy target for renal cell carcinoma
研究模型：肾细胞癌（选择4周龄雄性M-NSG小鼠作为研究对象，将5×107个OE-ciRS-7稳定表达的786-O细胞通过皮下注射到小鼠体内，以构建皮下异种移植肿瘤模型；将1×106个OE-ciRS-7稳定表达的786-O细胞通过尾静脉注射到小鼠体内，以构建肺转移小鼠模型）
动物模型：异种移植肿瘤模型、肺转移小模型鼠（分为3组，分别注射saline、si-ciRS-7、PBAE/si-ciRS-7纳米复合物）
给药方式：瘤内注射、尾静脉注射
给药剂量：10nM
给药频率：每周注射2次，注射3周
Fig1. 体内递送si-ciRS-7可抑制RCC肿瘤生长和转移
参考文献：Mao W, Wang K, Xu B, et al. ciRS-7 is a prognostic biomarker and potential gene therapy target for renal cell carcinoma[J]. Molecular cancer, 2021, 20(1): 1-7.
应用案例2：
Signal Transduction and Targeted Therapy（IF18.187）丨Phosphorylated NFS1 weakens oxaliplatin-based chemosensitivity of colorectal cancer by preventing PANoptosis
研究模型：结直肠癌（将两名CRC患者的新鲜肿瘤样本皮下植入小鼠背侧作为第一代（F0）。 一旦达到适当的体积，就将肿瘤切除，分成等份，并皮下植入裸鼠体内作为第二代（F1）。以构建结直肠癌PDX小鼠模型。当肿瘤变得可触及时，将荷瘤小鼠随机分为四组）
动物模型：结直肠癌PDX小鼠模型（分为4组，分别注射NFS1 siRNA+奥沙利铂、control siRNA+奥沙利铂、NFS1 siRNA+PBS、control siRNA+PBS）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5nmol
给药频率：/
Fig2.注射NFS1 siRNA可增强奥沙利铂体内抗肿瘤作用
参考文献：Lin J F, Hu P S, Wang Y Y, et al. Phosphorylated NFS1 weakens oxaliplatin-based chemosensitivity of colorectal cancer by preventing PANoptosis[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2022, 7(1): 1-16.
应用案例3：
Journal of Hematology & Oncology（IF17.388）丨Circular RNA circHERC4 as a novel oncogenic driver to promote tumor metastasis via the miR-556-5p/CTBP2/E-cadherin axis in colorectal cancer
研究模型：结直肠癌（选择4周龄雌性BALB/c裸鼠，将1×107稳定表达pLCDH-vector或pLCDH-circHERC4的SW480细胞通过上背注射或尾静脉注射到裸鼠体内，构建皮下异种移植肿瘤模型和CRC转移小鼠模型）
动物模型：异种移植肿瘤模型和CRC转移小鼠模型（分为4组，分别为circHERC4 OE + CTBP2 siRNA、circHERC4 OE + miR-556-5p mimic、对照组vector和circHERC4 OE）
给药方式：瘤内注射和尾静脉注射
给药剂量：1nmol和5nmol
给药频率：每周2次，注射60天后处死小鼠
Fig3. 注射CTBP2 siRNA或miR-556-5p mimic后可抑制circHERC4过表达导致的肿瘤生长加速、以及肺和肝转移结节的形成，阻碍circHERC4诱导的致癌作用
参考文献：He J, Chu Z, Lai W, et al. Circular RNA circHERC4 as a novel oncogenic driver to promote tumor metastasis via the miR-556-5p/CTBP2/E-cadherin axis in colorectal cancer[J]. Journal of hematology & oncology, 2021, 14(1): 1-20.
应用案例4：
Autophagy（16.016）丨m6A reader YTHDC1 modulates autophagy by targeting SQSTM1 in diabetic skin
研究模型：糖尿病性皮肤（使用7-8周龄雄性2型糖尿病小鼠（BKD-Leprem2Cd479/Nju, db/db）和年龄匹配的野生型WT小鼠作为研究对象。在产生皮肤创面前2天（第-2天），使用6mm皮肤活检打孔器在小鼠背部标记一个圆圈。然后，WT-si-NC、WT-si-Ythdc1和WT-si-Sqstm1组在圆圈上皮内注射相应的siRNAs（si-NC、si-Ythdc1或si-Sqstm1）。2天后（第0天），用6mm皮肤活检打孔器制作圆形全层皮肤创面，并从创面收获皮肤组织。在创面建模后的第0、2、4和6天，WT-si-NC、WT-si-Ythdc1和WT-si-Sqstm1组皮内注射相应的siRNA（si-NC、si-Ythdc1或si- Sqstm1）于圆形创面边缘）
动物模型：糖尿病性皮肤创面愈合小鼠模型（分为3组，分别注射si-NC、si-Ythdc1或si- Sqstm1）
给药方式：皮内注射
给药剂量：2.5 nmol
给药频率：分别在产生皮肤创面前2天、创面建模后第0、2、4和6天注射1次
Fig4. 注射si-Ythdc1或si-Sqstm1可导致小鼠皮肤中的创面愈合延迟（WT-si-NC: 78.822 ± 2.386%; WT-si-Ythdc1: 71.100 ± 1.888%; WT-si-Sqstm1: 70.176 ± 1.789%）
参考文献：Liang D, Lin W J, Ren M, et al. m6A reader YTHDC1 modulates autophagy by targeting SQSTM1 in diabetic skin[J]. Autophagy, 2021: 1-20.
应用案例5：
Cancer Research（IF12.701）丨Aberrant Nuclear Export of circNCOR1 Underlies SMAD7-Mediated Lymph Node Metastasis of Bladder Cancer
研究模型：膀胱癌（将两名膀胱癌患者的新鲜BCa样本作为皮下肿瘤植入4周龄NSG小鼠体内，即第一代F1；然后将F1小鼠的异种移植物切成小块并移植到F2小鼠中；当肿瘤达到1.5cm3时，将它们切除并分成等体积的块并移植到F3小鼠中。当PDX约为200mm3时，将F3小鼠随机分组）
动物模型：PDX小鼠模型（分为4组，分别注射Vector、体内优化的siSMAD7试剂、circNCOR1慢病毒、体内优化的siTGFBR1试剂）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：/
给药频率：每天注射一次，每5天停药一次，给药36天后处死小鼠
Fig5. 注射体内优化的siTGFBR1试剂显著抑制了PDX模型肿瘤体积生长，注射siSMAD7则得到相反的效果
参考文献：An M, Zheng H, Huang J, et al. Aberrant Nuclear Export of circNCOR1 Underlies SMAD7-Mediated Lymph Node Metastasis of Bladder Cancer[J]. Cancer Research, 2022.
应用案例6：
Cancer Research（IF12.701）丨N6-methyladenosine–Mediated Upregulation of WTAPP1 Promotes WTAP Translation and Wnt Signaling to Facilitate Pancreatic Cancer Progression
研究模型：胰腺癌（将2×106 PDAC细胞通过皮下注射到5周龄雌性BALB/c裸鼠体内，以构建异种移植裸鼠模型；将三名患者的新鲜PDAC样本作为皮下肿瘤植入4周龄NSG小鼠体内，即第一代F1；然后将F1小鼠的异种移植物切成小块并移植到F2小鼠中；当肿瘤达到1.5cm3时，将它们切除并分成等体积的块并移植到F3小鼠中，以构建PDX小鼠模型）
动物模型：胰腺癌异种移植裸鼠模型和PDX小鼠模型（分为2组，分别注射siControl、siWTAPP1）
给药方式：静脉注射
给药剂量：75 mg/kg
给药频率：前3天每天进行注射一次，之后3天注射一次，持续3周
Fig6. 异种移植裸鼠模型注射siWTAPP1显著降低了肿瘤负荷并延长了小鼠的存活时间；PDX模型给药siWTAPP1显著降低了PDX生长率，且siWTAPP1试剂对小鼠无明显毒性，因小鼠体重未显著降低
参考文献：Deng J, Zhang J, Ye Y, et al. N6-methyladenosine–Mediated Upregulation of WTAPP1 Promotes WTAP Translation and Wnt Signaling to Facilitate Pancreatic Cancer Progression[J]. Cancer Research, 2021, 81(20): 5268-5283.
应用案例7：
Journal of Experimental & Clinical Cancer Research（IF11.161）丨circCUL2 induces an inflammatory CAF phenotype in pancreatic ductal adenocarcinoma via the activation of the MyD88-dependent NF-κB signaling pathway
研究模型：胰腺导管腺癌（将3名患者的新鲜PDAC样本皮下植入4周龄NSG小鼠体内，即F1代；然后从F1小鼠中取出异种移植物，切成小块并重新移植到其他小鼠F2。当肿瘤达到约1500mm3时，将其切除并再次切成小块，重新植入其他小鼠F3。7天后异种移植物达到约100mm3，将F3小鼠随机分为3组）
动物模型：胰腺导管腺癌PDX小鼠模型（分为3组，分别注射si-Control、si-circCUL2、针对IL6的中和抗体）
给药方式：静脉注射
给药剂量：50mg/kg
给药频率：每3天一次，持续3周
Fig7. 注射si-circCUL2和anti-IL6抗体显著减少了PDX生长
参考文献：Zheng S, Hu C, Lin H, et al. circCUL2 induces an inflammatory CAF phenotype in pancreatic ductal adenocarcinoma via the activation of the MyD88-dependent NF-κB signaling pathway[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2022, 41(1): 1-23.
应用案例8：
Journal of Allergy and Clinical Immunology（IF10.793）丨CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia
研究模型：哮喘（使用8 周龄雌性BALB/c小鼠构建卵清蛋白OVA诱导的哮喘小鼠模型。简言之，即第0天和第14天，在所有小鼠的腹股沟、背部、颈部和足垫通过皮下注射20μg/只乳化在2mg氢氧化铝佐剂中的OVA以进行致敏。从第22天到第28天，致敏小鼠用1% OVA或等体积的0.1 M PBS通过射流雾化器雾化30分钟，每天一次，每次OVA雾化后2h，对小鼠进行si-mmu-circZNF652处理）
动物模型：过敏原诱导的变应性气道炎症小鼠模型（分为3组，分别注射si-NC、1mg/ml siZNF652、3mg/ml siZNF652）
给药方式：气管给药
给药剂量：1mg/ml或3mg/ml（50ul/只）
给药频率：每天1次，共7天
Fig8. 灌注in vivo si-circZNF652-3减弱了过敏性气道炎症中的杯状细胞化生
参考文献：Wang X, Xu C, Cai Y, et al. CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2022.
应用案例9：
Oncogene（IF9.867）丨FGD3 binds with HSF4 to suppress p65 expression and inhibit pancreatic cancer progression
研究模型：胰腺癌（使用LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC)转基因小鼠作为动物模型）
动物模型：KPC转基因小鼠模型（分为2组，分别注射siControl、siFGD3）
给药方式：尾静脉注射
给药剂量：500 nmol/kg
给药频率：第48天开始注射，每5天注射1次
Fig9. 注射siFGD3导致小鼠体内肿瘤更大
参考文献：Guo F, Cheng X, Jing B, et al. FGD3 binds with HSF4 to suppress p65 expression and inhibit pancreatic cancer progression[J]. Oncogene, 2022: 1-14.
更多动物用siRNA应用案例持续更新中，敬请期待……
